DNA测序

2020-10-27 17:24 香港化验所

DNA测序定义:

DNA测序(DNA sequencing)是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤的(G)排列方式。快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。

DNA测序原理:

Sanger双脱氧链终止法是Frederick Sanger于1975年发明的。测序过程需要先做一个聚合酶连锁反应(PCR)。PCR过程中,双脱氧核糖核苷酸可能随机的被加入到正在合成中的DNA片段里。由于双脱氧核糖核苷酸多脱了一个氧原子,一旦它被加入到DNA链上,这个DNA链就不能继续增加长度。最终的结果是获得所有可能获得的、不同长度的DNA片段。目前最普遍最先进的方法,是将双脱氧核糖核苷酸进行不同荧光标记。将PCR反应获得的总DNA通过毛细管电泳分离,跑到最末端的DNA就可以在激光的作用下发出荧光。由于ddATP, ddGTP, ddCTP, ddTTP(4种双脱氧核糖核苷酸)荧光标记不同,计算机可以自动根据颜色判断该位置上碱基究竟是A,T,G,C中的哪一个。

DNA测序

样品说明:

1、菌种

请提供新鲜的菌液或平板,4℃保存,时间不超过3天;菌液的沉淀菌体体积大于30ul。注明抗性,每个样品所用的载体,插入片段大小,测序的引物名称,单向或双向测序。

2、PCR产物

请提供特异性扩增的产物和特异测序引物并附带相应胶图,PCR产物大小不低于100bp,浓度不低于30ng/ul,体积大于20ul;特异引物浓度不小于5pmol/ul,每个反应提供5ul。由于纯化方法不同,对测序结果影响较大,故建议提供未纯化PCR产物。产物中不得含有任何染料等有颜色的物质。

3、纯化质粒

请标明质粒纯化方法,浓度不低于100ng/ul,体积大于15ul,每个样品所用的载体,要求测序的引物名称,单向或双向测序,插入片段大小。因为纯化方法不同,可能影响测序质量(酚、氯仿抽提的样品不适于测序),故建议提供菌液。

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